在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(fmdv)2a实现dtomato和串联magaininⅱ基因的共表达

？抗菌肽(antibacterialpeptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽，是天然免疫的重要组成部分。为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况，本研究利用口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,fmdv)2a将荧光蛋白dtomato基因和3个串联的magaininⅱ基因融合到一个开放阅读框中(openreadingframe,orf)，融合的基因被置于ppic9k载体醇氧化酶基因(aox1)启动子的下游，构建分泌型重组酵母表达载体ppic9k-dtomato-2a-3m，将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(pichiapastoris)gs115中，经g418筛选和pcr鉴定得到阳性转化子，然后将其转至摇瓶，在30℃、0.5%甲醇的条件下进行诱导表达，连续诱导3d。sds-page电泳图谱显示，在31kd(dtomato)和9.5kd(3m)处有蛋白条带出现，在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光，对大肠杆菌(escherichiacoli)和金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)抑菌试验结果表明，重组抗菌肽串联的magaininⅱ具有明显的抑菌效果。结果表明，由2a连接的融合基因(荧光蛋白dtomato和串联的magaininⅱ)在毕赤酵母中成功的进行了表达，fmdv2a在其c端剪切多聚蛋白，得到dtomato和串联的magaininⅱ两个独立而有活性的蛋白，为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法。