猪肌肉组织双向电泳分离条件的建立及常见问题分析

？为建立和优化猪肌肉组织蛋白质双向电泳技术，从提取方法、加样量、ipg胶条的选择、sds-page胶浓度、染色方法等多个方面对双向电泳分离效果进行比较研究。结果显示，液氮研磨+超声破碎法提取猪肌肉组织蛋白效果优于液氮研磨法，前者细胞破碎彻底蛋白质溶解性好且核酸污染少，图谱质量较好；18cmph4~7的ipg胶条分离效果比ph3~10非线性ipg胶条好；对于银染，18cmph4~7的ipg胶条150μg上样量比较适宜；同一肌肉样品的三块胶的重复性可达70%以上；同时，对双向电泳过程中的典型问题作了详尽分析。研究结果表明，通过优化的双向电泳条件获得了较高分辨率和较好重复性的猪肌肉组织双向电泳图谱，可用于后续蛋白质组学分析。