猪甲状腺激素应答基因spot14(thrsp)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化

？甲状腺激素应答基因(thyroidhormoneresponsivespot14,thrsp)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因，参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控，对动物脂肪生成具有重要的调控作用。为进一步研究猪spot14基因所编码蛋白质的生物学功能，本实验将猪spot14(genbank登录号:jf_951726)的orf片段与表达载体pet-28α(+)进行重组，获得的重组子pet-28α(+)-s14，转化大肠杆菌(escherichiacoli)bl2l(de3)感受态细胞，重组菌经iptg诱导，通过sds-page分析显示，目的蛋白分子量约为20.91kd，且主要以包涵体形式存在，最佳诱导条件是37℃1mmol/liptg诱导5h。将获得的包涵体用6xhisni-nta纯化柱纯化后，采用westernblot进一步检测到了21kd目的蛋白的表达。重组质粒pet-28α(+)-s14在大肠杆菌bl21(de3)中成功地得到了表达，不仅为spot14基因生物学功能的研究，而且为进一步研究s14蛋白功能，了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料