黄芩苷对热应激犊牛睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子(gdnf)和干细胞因子(scf)表达的影响

？黄芩苷(baicalin)具有清热镇静、抑菌抗炎等作用，通过不同浓度黄芩苷对热应激下睾丸支持细胞(sertolicells,scs)表达胶质细胞源性神经生长因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,gdnf)和干细胞因子(stemcellfactor,scf)的影响，探讨黄芩苷是否可以通过提高scs的耐热性保护细胞，提高scf与gdnf的表达。采用二步酶消化法分离犊牛(bostaurus)睾丸组织获得scs，4h差速贴壁纯化，分别采用rt-pcr鉴定标志性基因gdnf和scf的表达，福尔根染色鉴定细胞形态。选用第3代对数生长期的scs，通过噻唑蓝(methylthiazoletetrazolium,mtt)筛选黄芩苷安全使用浓度；设对照组(37℃)、42℃单纯热应激组和42℃热应激加黄芩苷(0.1,1,10和20μg/ml)组；用mtt检测细胞存活率，提取各组细胞总rna和总蛋白，分别用实时荧光定量pcr(real-timequantitativepcr,qrt-pcr)和酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay,elisa)检测gdnf和scfmrna及其蛋白的表达。结果显示，第3代原代细胞生长良好，rt-pcr检测可见gdnf和scfmrna表达，福尔根染色显示有卫星核小体存在，表明分离培养的细胞为scs。对第3代scs进行热应激处理，与对照组(37℃)比较，42℃单纯热应激组细胞存活率极显著(p＜0.01)下降，gdnf和scfmrna(p＜0.01)与蛋白(p＜0.05)的表达也降低。与42℃单纯热应激组比较，用浓度为1μg/ml(p＜0.05)和10μg/ml(p＜0.01)黄芩苷作用细胞的存活率升高；浓度在0.1~20μg/ml黄芩苷作用的细胞，其gdnf和scfmrna的表达量均极显著(p＜0.01)高于42℃单纯热应激组，而在黄芩苷浓度为1μg/ml时，scf(p＜0.01)和gdnf(p＜0.05)蛋白表达量高于42℃单纯热应激组，并且基因和蛋白的表达量随着黄芩苷浓度的增加呈现先上升后下降的趋势。结果表明，黄芩苷能提高热应激下scs的存活率以及gdnf和scf的表达量。本实验从分子水平研究黄芩苷对scs的抗热作用，为在实践中增强机体抗热休克能力提供了理论依据。