基于m蛋白检测犬瘟热抗体elisa方法的建立

？犬瘟热病毒(caninedisrempervirus,cdv)是导致犬科等多种属动物发热、腹泻、幼仔死亡等症状的传染病病原体，建立针对cdv的快速灵敏的诊断方法对于该病的防治具有重要意义。本研究利用rt-pcr方法扩增得到cdv-m基因，构建原核重组表达载体pet-28(a)-cdv-m，并在大肠杆菌(escherichiacoli)中实现了该蛋白的表达和纯化，westernblot验证重组蛋白的抗原性，用纯化的重组蛋白his-cdv-m作为抗原包被酶标板，elisa方阵实验确定该重组蛋白的包被浓度，建立了检测临床犬血清样品的cdv-m蛋白抗体的间接elisa方法，比较本实验方法与其他试剂盒之间的特异性和灵敏性。结果表明重组蛋白his-cdv-m得到较好表达，纯化后蛋白浓度为2.840mg/ml。westernblot结果表明重组抗原能与犬瘟热阳性血清进行反应。方阵实验确定抗原最佳工作浓度为8.88μg/ml，抗体最佳稀释度为1∶160，应用本方法检测223份犬血清样品，与进口cdv诊断试剂盒检测结果符合率为96%。本研究建立的基于m蛋白的犬瘟热病毒抗体检测方法具有较高的特异性和灵敏性，为犬瘟热病毒的诊断及m蛋白的功能研究提供了工具。