稳定表达猪sarm1的marc-145细胞系的建立

？猪(susscrofa)sarm1基因是重要的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,prrsv)候选基因，建立稳定表达sarm1的猴胚胎肾上皮细胞系(marc-145)是进行sarm1功能研究的基础。本研究成功构建pegfp-n1-psarm1真核表达载体，并在marc-145细胞中瞬时转染，结果显示，猪sarm1-gfp融合蛋白定位于marc-145细胞的线粒体。使用浓度为800μg/ml的g418对转染pegfp-n1-psarm1的细胞进行加压筛选6d，并进一步使用单克隆法筛选出稳转细胞系，结果显示，稳转细胞系形态正常，绿色荧光稳定表达。rt-pcr和westernblot检测结果均显示sarm1基因在稳转细胞系中稳定表达。应用qrt-pcr方法在prrsv感稳转细胞系12h后可以检测到prrsv开放阅读框7(openreadingframe7,orf7)在稳转细胞系中表达，并且稳转细胞系中orf7的表达量在感染后12、24和48h极显著低于普通marc-145细胞中的表达量(p＜0.01)。组织半数感染量(50%tissuecultureinfectivedose,tcid50)测定进一步证明prrsv在稳转细胞系中复制能力较低。本研究为进一步开展猪sarm1在prrsv感染过程中的功能研究提供了基本材料。