鲨烯环氧酶基因(sqes)的克隆及其在温度胁迫下与枇杷悬浮培养细胞中熊果酸(ua)含量的相关性

？熊果酸(ursolicacid,ua)是枇杷(eriobotryajaponical.)中重要的生物活性成份，鲨烯环氧酶(squaleneepoxidase,sqe)是ua等五环三帖生物合成途径中的限速酶之一。为了克隆sqes基因，寻找枇杷细胞悬浮培养获取ua合适的胁迫温度，建立此胁迫温度下sqes的差异表达及其与ua含量的联系，本研究以枇杷悬浮培养细胞为材料，在对数生长期中后期设置低温15℃和高温35℃处理，研究收获时(12d)细胞生长与目标产物ua的相互关系。同时，采用同源克隆方法分离sqes，研究15℃处理中，两个枇杷鲨烯环氧酶基因(ejsqe1和ejsqe2)的差异性表达。结果表明，ejsqe1(genbank登录号:jq294053.2)与ejsqe2(genbank登录号:jq294054.2)氨基酸序列的相似度为69.89%，序列的两末端差异最大；15℃下，距离收获48h的处理中ua总含量最高；ejsqe1和ejsqe2的表达量均出现峰值。ejsqe1和ejsqe2的表达量均出现峰值。15℃下，距离收获24h的处理，两者表达量显著下降(p＜0.05)；距离收获长于24h的处理，枇杷悬浮细胞中ejsqe1和ejsqe2两个基因的表达量之和以及ejsqe2基因与ua的含量呈现出显著正相关(p＜0.05)。本研究获得了sqes基因序列及胁迫温度下的表达特征，为枇杷细胞悬浮培养ua调控机制的研究提供基因源及参考资料。