应用地高辛标记探针原位杂交方法检测仔猪小肠fcrn的表达

？摘要：【研究目的】旨在建立检测仔猪小肠fcrn表达的地高辛标记探针原位杂交的方法，研究fcrn在仔猪小肠各段的表达分布。【方法】根据genbank公布的猪fcrn重链（α链）mrna基因保守序列设计并合成带地高辛标记的原位杂交试验用cdna探针。经仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度选择，以及h2o2溶液祛除小肠组织中内源性辣根过氧化物酶作用对杂交结果的影响，选择合适的固定剂、细胞膜蛋白消化剂、杂交液和确定杂交反应的温度、时间以及杂交后处理等一系列试验条件优化，建立了检测仔猪小肠fcrnmrna的原位杂交方法。【结果】①仔猪小肠冰冻组织切片最佳厚度为14μm；②仔猪小肠内存在内源性辣根过氧化物酶，3％的h2o2溶液祛除该酶的效果良好，但在本研究中内源性辣根过氧化物酶的存在试验结果并无明显影响，无需祛除；③在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织的小肠腺和粘膜下层等部位存在棕黄色阳性颗粒，均检测到清晰的杂交信号。【结论】应用地高辛标记探针进行仔猪小肠fcrnmrna的原位杂交方法检测效果良好；fcrnmrna在仔猪十二指肠、空肠和回肠组织等营养物质吸收部位均有表达，提示fcrn在这些部位的存在与肠道igg转运的相关性。