猪肌内前体脂肪细胞的体外培养

？本研究建立了猪肌内前体脂肪细胞的体外培养模型，以期为更深入研究猪肌内脂肪代谢提供新的实验方法。实验采集出生5d仔猪的背最长肌组织，ⅱ型胶原酶消化2h后400目筛网过滤，然后1500r/min离心，沉淀用含10%胎牛血清的dmem/f12培养基(完全培养基)重悬后差速贴壁2h，弃去原有培养基，加入新的含10%胎牛血清的dmem/f12培养基(完全培养基)进行培养。细胞经传代且完全融合48h后，在完全培养基中添加0.5mmol/l3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(ibmx)，1μmol/l地塞米松(dex)，10mg/l胰岛素(ins)进行诱导培养48h，再换以含10mg/l胰岛素的完全培养基培养48h，最后换完全培养基继续培养，直至90%的细胞出现脂滴。培养结果：细胞贴壁生长，呈短梭状或棱形，经诱导培养后细胞充脂率高。经形态学观察、生长曲线及油红o脂肪染色法鉴定，证明是肌内前体脂肪细胞。普通pcr及实时荧光定量pcr均检测到了脂联素基因的表达。本研究通过差速贴壁法成功培养了猪肌内前体脂肪细胞，并通过诱导培养重现了其分化、成熟的全过程。