大肠杆菌分子伴侣表达的辅助载体构建及应用

？异源蛋白在大肠杆菌不能正确折叠表达成包涵体，分子伴侣能在细胞内帮助异源蛋白折叠，改善蛋白的聚集。本研究以大肠杆菌(escherichiacoli)dh5α菌株dna为模板，利用pcr技术扩增出6个分子伴侣编码基因groel、groes、dnak、dnaj、grpe和clpb，分别将groel、groes和grpe(ⅰ组)插入pcdfduet-1载体，将dnak、dnaj和clpb(ⅱ组)基因插入prsfduet-1，构建辅助载体pr-gesp和pc-djkl，每个重组载体中含有一个人工操纵子，每个基因上游含有t7启动子。sds-page结果显示，诱导后的重组大肠杆菌上清除了dnaj外其它5个蛋白明显表达。sds-page分析了共表达分子伴侣对玉米(zeamays)四吡咯分子合成的谷氨酸-1-半醛氨基转移酶、尿卟啉原ⅲ脱羧酶和西罗叶绿三酸：铁螯合酶在大肠杆菌的折叠和聚集影响，结果显示，groel、groes和grpe能防止玉米西罗叶绿三酸：铁螯合酶在大肠杆菌的聚集，但dnak、dnaj和clpb分子伴侣对该酶则没有作用；groel、groes和grpe能部分抑制玉米谷氨酸-1-半醛氨基转移酶在大肠杆菌的聚集，但是对改变玉米尿卟啉原ⅲ脱羧酶的聚集没有明显作用，这些结果表明，不同分子伴侣组对改善本研究选择的3个玉米蛋白在大肠杆菌可溶性表达的效果有差异。