中国野生华东葡萄抗白粉病转录因子vprfp1基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备

？为揭示中国野生华东葡萄抗病转录因子基因在与葡萄白粉病互作过程中的作用机制，本研究以中国野生华东葡萄(vitispseudoreticulataw.t.wang)高抗葡萄白粉病株系白河35-1为材料，接种葡萄白粉病菌(unicinulanecator(schw.)burr.)病原菌诱导后7个不同时期的反转录产物为模板，用rt-pcr扩增得到v.pseudoreticulataring-fingerprotein1基因(vprfp1)的开放阅读框1053bp；将其克隆到pmd19-t载体经测序后，亚克隆到pgex-4t-1原核表达载体并转化大肠杆菌(escherichia.coli)bl21；经iptg诱导表达出64kd的融合蛋白gst-vprfp1，主要以包涵体表达形式存在；采用电透析法纯化融合蛋白，并以纯化产物免疫新西兰大白兔获得抗血清，westernblot检测免疫-抗原反应良好。本研究结果表明，在27℃、0.1mmol/l的iptg诱导4h融合蛋白gst-vprfp1的表达量最大，免疫大白兔获得的抗血清能够用于vprfp1基因的功能分析。