香鱼抗凝血酶基因(at)cdna的克隆、序列分析及组织表达特征

？抗凝血酶(antithrombin,at)主要抑制凝血酶(thrombin)及其它凝血因子的活性，并具有重要的抗炎活性。本实验从香鱼(plecoglossusaltivelis)肝组织cdna文库中成功获得了香鱼at基因的cdna全序列(embl登录号：fn429980)。测序结果表明，香鱼at基因cdna全长1487个核苷酸，包含1个大的开放阅读框(orf)，推测编码1个由453个氨基酸组成的蛋白，n端23个氨基酸为信号肽序列。成熟at具有与哺乳动物at相似的特征结构，包括：羧基末端附近的丝氨酸蛋白酶活性中心、6个保守的cys残基形成的3个二硫键结构和4个n-糖基化位点。氨基酸序列分析表明，香鱼at与大西洋鲑(salmosalar)at氨基酸序列同源性最高，为81%。系统进化树分析表明，物种at的进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致，香鱼at位于鱼类at簇中，与大西洋鲑、红鳍东方豚(takifugurubripes)和斑马鱼(daniorerio)at进化相关性最高。atmrna在健康香鱼的肝组织中表达量最大，在脾、肾和脑中表达量较低。实时荧光定量pcr结果表明，在鳗利斯顿氏菌(listonellaanguillarum)侵染4和8h的香鱼肝组织中atmrna表达量显著下调(p<0.05)，但随着病程发展，12~36h，atmrna表达水平显著上调(p<0.05)，揭示at是一个病程相关蛋白，并参与香鱼细菌感染导致的急性期反应。