秦川牛天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1基因(nramp1)n端序列的原核表达及纯化

？为了研究牛天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1(nramp1)的功能，探求转基因抗胞内感染菌牛新材料创制的功能基因，本实验应用rt-pcr方法从秦川牛(bostaurus)外周血中扩增出nramp1编码基因n端序列，并将其克隆到pmd18-tsimple载体，酶切后连接于pgex-4t-1表达载体，命名为pgex-n2。将重组质粒pgex-n2转化大肠杆菌(escherichiacoli)bl21(de3)，经iptg诱导，sds-page电泳检测gst-nramp1-n融合蛋白表达，并筛选最佳诱导条件，用谷胱甘肽sepharose4b介质分离纯化该融合蛋白。结果表明，牛nramp1n端编码序列长186bp,与genbank中的相应的牛基因序列(u12862.1)对比存在一个碱基差异，致使其编码的第49位氨基酸为丙氨酸。构建的牛nramp1n端表达重组质粒pgex-n2，于35℃、0.1mmol/liptg、诱导10h，在大肠杆菌中高效表达，表达产物的分子量为33kd。结果为进一步研究牛nramp1在机体抵抗胞内菌感染中的作用并为利用该基因进行转基因抗病牛的培育提供了实验依据和实验材料。