黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)的克隆及其在中国仓鼠卵巢(cho)细胞中的表达

？β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系三大成员之一，被认为是纤维素糖化的限速酶。本研究克隆黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)，并在中国仓鼠卵巢(cho)细胞中进行表达分析。以genbank上黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)序列为模板，设计特异性引物，从黑曲霉(asperjillusniger)基因组dna中扩增目的片段，通过soe-pcr的方法将猪腮腺分泌蛋白信号肽序列sp和bgl1相连，成功构建分泌型真核表达载体pc6-sp-bgl1，利用脂质体介导法瞬时转染哺乳动物cho细胞，通过rt-pcr和westernblot检测，最后通过dns(dinitrosalicylicacid)法测定表达产物酶学活性。pcr扩增得到的目的序列与文献报道序列的相似性为91%，预测的蛋白氨基酸序列相似性为99%。rt-pcr和westernblot检测证明，外源基因bgl1在cho细胞中得到表达；分泌到细胞培养上清中的重组蛋白对水杨素的水解活性为1.74u/ml，说明重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶活性。本研究克隆得到黑曲霉bgl1基因并在哺乳动物cho细胞中进行表达，为β-葡萄糖苷酶在单胃动物中的利用提供了基础研究资料。