大白菜简单序列重复(ssr)和插入/缺失(indel)标记的开发及通用性分析

？为探讨大白菜基因组序列中ssr位点的分布规律并开发ssr引物，利用ssrhunter软件对大白菜a10(16899818~17299817)的dna序列进行简单序列重复(ssr)位点查找，共得到394个ssrs，平均每1.02kb出现1个ssr。二核苷酸和三核苷酸重复是最主要的ssr类型，分别占79.44%和18.78%。为了提高ssr标记开发的准确性和通用性，对检索得到的含ssr位点的序列进行了同源比对，选取符合条件的15条ssr序列并设计引物；依据blast过程中发现的在ssr位点不存在差异而在其侧翼序列中存在插入/缺失(indel)差异的序列，设计了19条indel引物。用34对ssr及indel引物在6个大白菜(brassicarapassp.pekinesis)材料中进行多态性研究，发现28对引物能扩增出理想的pcr产物，有效扩增率为82.35%，其中27对引物具有多态性，多态性比率为79.41%。为验证ssr引物的真实性，随机对4对ssr引物的部分白菜扩增片段进行了测序，发现100%的片段具有相应的ssr位点。28对ssr和indel引物在甘蓝(b.oleracea)、油菜(b.napus)和萝卜(raphanussativus)品种的有效扩增率分别为85.71%、100%和77.78%，说明新开发的ssr和indel标记具有较好的多态性和通用性。利用6对引物分析了48份十字花科种质的遗传多样性，结果表明48份材料被明显地区分成白菜和甘蓝组、萝卜组、油菜组3大类群，与传统分类一致。大白菜ssr和indel标记的开发对于十字花科种质亲缘关系及遗传多样性分析具有重要的应用价值。