猪诱导多能干细胞(ips)嵌合胚胎的制备

？猪诱导多能干细胞(ips)具有自我更新和多向分化潜能，是医学和细胞生物学研究理想的材料。为了探索猪ips细胞的胚胎嵌合能力，本实验采用piggybac转座子系统pb[act-rfp]ds和act-pbase载体，共转染猪ips细胞，获得带有红色荧光标记的猪ips细胞株ps24-r。并通过显微注射方法，将供体细胞ps24-r注入到4~8细胞期的胚胎腔隙，制备嵌合胚胎，待其继续发育至囊胚阶段，统计ps24-r细胞在胚胎中的嵌合情况。结果显示，通过转座子系统piggybac标记的猪ps24-r细胞能够稳定表达红色荧光，以其作为供体细胞制备猪嵌合胚胎能够有效观察ips细胞在胚胎中的嵌合情况。将1、5和10个猪ps24-r细胞和1个猪ps24-r细胞团分别注射到猪胚胎中构建嵌合胚胎，随着猪ips细胞注射数量的增加，注射胚胎的囊胚率逐渐下降，但嵌合比例逐渐升高。同时与孤雌胚胎相比，嵌合胚胎中多能基因oct4、sox2和nanog表达显著提高。由此可见，采用piggybac转座子标记的猪ps24-r细胞能够在猪早期胚胎发育阶段实现嵌合，为ips细胞嵌合猪的生产提供了基础资料。