一种辣椒ropgtpase激活蛋白基因的分离及其特征分析

？rop(rho-relatedgtpaseofplant)是植物中存在的一种特殊的小g蛋白。其与gtp(guanosinetriphosphate)结合形成激活态，与gdp(guanosinediphosphate)结合形成失活态，并通过其激活态和失活态的转换启动和终止植物多种信号过程。rop不同结合形式的转换受到一系列调控因子的调控。本研究以一个辣椒(capsicumannuuml.)rop蛋白(carop1)的组成型激活态ca-carop1为诱饵，利用proquesttm酵母双杂交体系，从辣椒幼苗猎物文库中分离获得一种ropgtpase激活蛋白(ropgtpaseactivatingproteins,ropgap)基因，将其命名为caropgap3。生物信息学分析表明，caropgap3全长1597bp，包含一个1437bp的开放阅读框，编码478个氨基酸，其氨基酸序列不仅含有3个保守的gap结构域，其n端还含有crib(cdc42/rac-interactivebindingmotif)结构域，属于植物特有的一类ropgap亚家族。酵母双杂交验证显示caropgap3只能与组成型激活态(ca)的ca-carop1互作而不能与显性失活态(dn)的dn-carop1互作，且含crib结构域的n端对他们之间的互作没有明显的调控作用。亚细胞定位分析显示，caropgap3主要分布于细胞膜上，且含crib结构的n端在其膜定位中起重要调节作用。荧光定量pcr分析显示，caropgap3基因在辣椒幼叶中的表达量最高，约为幼根的17倍、成熟根和花器官的8倍。caropgap3基因的这种结构及组织表达特点可能与其参与的特定信号路径密切相关。本研究为进一步解析辣椒carop1介导的信号调控机制提供基础数据。