鸡新城疫病毒f基因与鸡白介素-2(il-2)基因在真核载体中串连表达及免疫原性

？为了探索鸡白介素-2(il-2)对鸡新城疫病毒(ndv)f蛋白免疫效果的增强作用，本研究通过重叠延伸pcr技术(soe-pcr)利用连接子(g2sg3s)将鸡il-2基因和鸡ndvf基因串连，克隆至真核表达载体pcdna3.1(+)，构建了表达质粒pcdna-il-2-f。通过脂质体介导dna瞬时转染法，将重组质粒pcdna-il-2-f和pcdna-f分别转染鸡胚成纤维细胞，westernblot验证表明，pcdna-il-2-f和pcdna-f均能瞬时表达f蛋白，表达蛋白分别为76.0和59.6kd，表达蛋白的大小与预期一致并具有抗原性。将表达质粒免疫spf鸡(gallusdomedticus)，6d后开始用elisa方法检测ndv的特异抗体，免疫20d后，用f48e9进行攻毒。结果显示，免疫pcdna-il-2-f的鸡群产生的抗体水平(p<0.05)高于混合免疫pcdna-il-2和pcdna-f，高于免疫pcdna-f的鸡群，但比免疫lasota组的抗体水平要低。攻毒试验说明免疫pcdna-il-2-f组比免疫其他质粒组保护率高，这说明串连表达的免疫效果要好于二者的联合使用，为病毒病疫苗的研制提供了思路。