国产丝裂霉素处理的sto细胞作为饲养层培养牛胚胎干细胞

？寻找一种适合牛胚胎干细胞生长的饲养层对成功培育牛胚胎干细胞有重要意义。本研究采用不同浓度国产丝裂霉素处理的sim小鼠(musmusculus)成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐鸟苯苷亚系(sto细胞)作为饲养层培养牛胚胎干细胞，为牛胚胎干细胞培养体系的建立提供实验依据。用10、15、20、30和40μg/ml国产丝裂霉素分别处理1.5、3.0和4.0h的sto细胞；形态学观察不同代次sto细胞生长状态，并对生长在以sto细胞为饲养层的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶染色(akp)、阶段特异性胚胎细胞表面抗原-4(oct-4)和阶段特异性胚胎抗原-1(ssea-1)免疫组化检测、体外分化形成拟胚体等实验。结果显示，当丝裂霉素的浓度为15μg/ml处理3.0h可有效的抑制细胞分裂；sto细胞在5~10代作为饲养层细胞形态最好且获得的牛胚胎干细胞akp染色及oct-4和ssea-1抗原表达均成阳性，分别在体外分化培养形成了拟胚体。结果证明使用国产丝裂霉素能有效地处理sto细胞且在以sto细胞作为饲养层培养的牛胚胎干细胞能保持未分化状态，可以作为常规饲养层培养牛胚胎干细胞。