稳定表达wnt3a基因的猪胰腺干细胞株的建立

？wnt3a是经典wnt通路上游的一个重要分泌蛋白，wnt3a蛋白的活化可促进多种细胞的增殖和分裂。为了揭示wnt3a在猪胰腺干细胞(psc)增殖及分化中的调控机理，采用rt-pcr从pgks2p(+)-wnt3a质粒中扩增出wnt3a全长片段，将测序正确的wnt3a连接到带有水母绿色荧光蛋白(acgfp1)报告基因的真核表达载体pires2-acgfp1中，构建重组质粒。经ecorⅰ/bamhⅰ酶切鉴定后，用脂质体转染至猪psc。用抗生素g418筛选3周后获得稳转pires2-acgfp1-wnt3a的细胞株。荧光显微镜下观察到几乎所有细胞表达绿色荧光蛋白。rt-pcr和westernblot的结果显示，稳转wnt3a组的猪psc中wnt3amrna及蛋白表达水平比对照组明显升高。这些结果表明，稳定表达wnt3a的猪胰腺干细胞株成功建立，为进一步研究wnt3a在猪psc增殖及分化中的作用机理提供了基础资料。