人胰腺激肽释放酶cdna的克隆、序列分析和原核表达

？:为了研制人激肽释放酶（klk1）特异单克隆抗体和进行重组酶的鉴定及纯化，根据已发表的人klk1序列设计引物，用pcr扩增法从人胰腺单链cdna库中特异地扩增出klk1cdna。将其克隆入pgem-t载体中,对5个重组质粒进行了序列测定，其中1个cdna克隆的核苷酸序列与已发表的人肾/胰/唾液腺klk1cdnas序列完全相同或有3个核苷酸差异。将去除信号肽序列的klk1？？cdna以正确阅读框插入表达载体pgex-4t-3,构建成重组质粒pgex-klk1。此重组质粒转化的e.coli经iptg诱导后表达分子量为48kdgst-klk1融合蛋白，表达产物主要以不溶性包涵体形式存在，可溶性部分能被glutathionesepharose4b特异吸附，两者都能被gst特异单克隆抗体识别。用sds-page分离纯化的融合蛋白免疫小鼠，获得的抗血清的elisa效价为1∶1600。结果表明，克隆的人klk1cdna及其表达产物是正确的，可以用于人klk1单克隆抗体的制备。