益母草抗菌蛋白ljamp2的表达及抗菌活性分析

？ljamp2是一种分离自益母草种子的非专一性脂转移蛋白类抗菌蛋白。为了获得足量的蛋白样品以满足其抗菌机理研究之需，我们将编码成熟的ljamp2蛋白的基因（genbankaccessionno.ay971513）插入到巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)表达载体ppic9k中；重组质粒ppic9k-ljamp2经线性化后，用电转化法导入毕赤酵母(p.pastoris)菌株gs115（his-/mut+）中。转化子用含1.75mg/mlg418的ypd平板筛选获得多拷贝mut+转化子。最后，将1%甲醇诱导ljamp2表达后的发酵液，经进一步浓缩、凝胶过滤脱盐、cmff阳离子交换色谱和反相hplc进行纯化，获得纯度达到90%以上的ljamp2；菌株诱导24h即有ljamp2的表达，诱导168h表达量达到最高；表达的ljamp2蛋白对黑曲霉等真菌表现出抑制活性。