银杏果仁抗菌蛋白的分离纯化及其基因克隆和原核表达初步研究

？通过40%及80%硫酸铵分级盐析，cmsephorosef.f.离子交换层析和superdex75凝胶过滤层析；从银杏(ginkgobiloba)种仁中分离纯化到一种表观分子量约为12kd的抗菌蛋白。经过maldi-tof-mspmf鉴定表明，该蛋白与一种新型抗菌蛋白gnk2（ginkbilobin-2）具较高匹配率(p<0.05)；根据esi-ms/ms内肽氨基酸测序结果设计简并引物，扩增该蛋白基因一段，经比对发现与gnk2基因序列相似性也达99%。按照gnk2基因序列设计同源引物，利用rt-pcr克隆该抗菌蛋白全长基因，提交genebank(accessionno.fj865399)，并以此构建原核表达载体pgex-gk2-1转化大肠杆菌bl21（de3），sds-page和westernblot分析表明融合蛋白在大肠杆菌中能够高效表达。这为抗菌蛋白抗菌机理的深入研究以及转基因抗病种质的获得等方面奠定基础。