鸡γ-干扰素基因在昆虫细胞/杆状病毒载体系统中的表达

？：将鸡（gallusgallus）的γ-干扰素（interferon-γ,ifn-γ）基因亚克隆到杆状病毒转移载体pmelbacb的bamhⅰ位点上，构建真核转移载体pmelbacb-chifn-γ，经限制性内切酶消化、chifn-γ特异引物pcr鉴定和序列测定，证明目的基因正确克隆到载体的预期位点。将纯化的pmelbacb-chifn-γ质粒与杆状病毒dna（bac-n-bluetmdna）共转染sf9昆虫细胞，经3轮蓝斑筛选纯化，获得了重组杆状病毒rbaculovirus-chifn-γ。提取病毒dna经chifn-γ特异引物和重组杆状病毒特异引物pcr鉴定，证明获得了纯化的重组杆状病毒，命名为rbaculovirus-chifn-γ。用该重组病毒接种sf9昆虫细胞，收获接种后不同时间的细胞进行sds-page,结果表明chifn-γ基因在昆虫细胞中获得了表达，表达的重组蛋白分子量约为19kd。应用在大肠杆菌(escherichiacoli)原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗chifn-γ多克隆抗体进行westernblot分析，表明表达的重组蛋白具有抗原性。