phas合酶phac2基因转化烟草叶绿体的研究

？中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-phas,mcl-phas)属于微生物聚酯。ⅱ型pha合酶是mcl-phas生物合成途径中的关键酶。将编码ⅱ型pha合酶的基因phac2与水稻(oryzasativa)叶绿体psba基因的启动子和终止子构建表达盒(rpsba-pro-phac2-rpsba-ter)，连同壮观霉素抗性基因aada表达盒(prrn-aada-tpsba-ter)一起克隆进烟草叶绿体基因组同源片段rbcl和accd中，构建了烟草叶绿体转化表达载体ptc2。基因枪法转化烟草(nicotianatobacuml.)叶片，获得具有壮观霉素抗性的转基因烟草。对t0代和t1代转基因植株的pcr和southernblot鉴定结果表明,外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中，t1代转基因植株已达同质化。rt-pcr分析结果证实phac2基因已在转录水平上表达。转基因植株的正反交试验证明外源基因在转基因后代中遵循母性遗传规律，不存在转基因的花粉漂移现象。通过叶绿体遗传转化,实现中长链羟基脂肪酸聚酯合成关键酶基因phac2在烟草叶绿体基因组中的稳定转化。