基因芯片技术检测5种马病毒的研究

？通过分子克隆技术获得马疱疹病毒1型(equineherpesvirus1,ehv1)、马动脉炎病毒(equinearteritisvirus,eav)、马流感病毒(equineinfluenzavirus,eiv)、马传染性贫血病毒(equineinfectiousanaemiavirus,eiav)和东部马脑脊髓炎病毒(easternequineencephalomyelitisvirus,eeev)等5种病毒各一段高度保守的特异性基因片段，用芯片点样仪逐点分配到处理过的玻片上，制备成检测芯片。提取样品中的rna，进行反转录和荧光标记后滴加到芯片上进行特异性杂交，对杂交结果进行扫描检测和计算机软件分析。结果显示，制备的基因芯片可同时检测和鉴别上述5种病毒，可检测到阳性杂交信号的最高稀释度为10-6的病毒液，约25个病毒dna拷贝，但其它病毒材料未见红色荧光信号，证明了本方法的特异性。在进口马的隔离检疫期间，采集马鼻肺炎、马动脉炎中和抗体阳性但病毒分离阴性马匹的白细胞悬液，分别在ehv1和eav位点处可检测到阳性杂交信号。证明基因芯片技术不但快速、准确和敏感，而且可同时进行多种病毒的检测。