甘蔗spsⅲ基因组dna及5'侧翼序列的克隆与分析

？甘蔗是我国南方地区重要的糖料作物。为达到增糖的育种目标，对甘蔗蔗糖积累主要限速步骤的研究是必不可少的。蔗糖磷酸合成酶(sps)作为蔗糖合成途径的关键限速酶，对甘蔗中蔗糖合成和碳水化合物分配有着重要的影响。本研究采用长距离pcr法(ld-pcr)克隆到两条不同长度的甘蔗(saccharumspp.cv.fn95-1702)spsⅲ基因组dna片段。序列分析表明，所得的片段基因结构相同，均含有13个外显子和12个内含子，其开放读码框(orf)编码964个氨基酸，序列提交genbank，获得查询登陆号eu278617、eu278618。以此为基础，继续从甘蔗基因组中扩增出先前未知的spsⅲ基因5'侧翼序列，申请genbank登陆号kc422670。转录因子结合位点生物信息学分析表明，该序列含有顺式dna作用元件和启动子tata启动盒。为进一步验证5'侧翼序列的启动子活性，分别截取5段不同长度的spsⅲ基因5'侧翼序列与报告基因gus融合，构建嵌合基因表达载体质粒，基因枪微弹轰击甘蔗愈伤组织观测瞬时表达，证实了所克隆到的5'侧翼序列具有启动子活性，是甘蔗spsⅲ基因的启动子，且具有一定的表达特性。本研究通过克隆分析spsⅲ基因以其启动子，为研究基因结构和生物学功能提供了基础资料。