甘蔗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(ugpase)转化拟南芥及转基因植株的生理特性分析

？尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(udp-glucosepyrophosphorylase，ugpase)是植物糖代谢的主要参与酶之一，在植物的生长发育过程中起着重要作用。本研究将甘蔗(saccharumofficinarum)ugpase基因cdna片段连接至载体pbi121，通过bamhⅰ和sacⅰ酶切鉴定及测序验证，结果表明，植物表达载体成功构建；通过农杆菌(agrobacteriumtumefaciens)的介导，采用浸花法转化拟南芥(arabidopsisthaliana)。结合卡那霉素抗性筛选和pcr检测，获得了5株t0代转基因植株。对t1代转基因植株进行pcr及southernblot分析，结果表明，目的基因已成功转入拟南芥中，并且不同的转化植株含有目的基因的拷贝数不同。对t2代转基因植株进行pcr和rt-pcr检测，结果表明，目的基因不仅能在自交系后代中稳定遗传，而且在rna水平也有表达。同时，对t2代转基因植株的可溶性总糖、蔗糖及淀粉含量进行测定，结果表明，与野生型相比，转基因植株中可溶性总糖含量没有明显的变化，但蔗糖含量有所提高，并且差异明显，比野生型植株提高了50.85%~96.99%，而淀粉含量都较野生型植株的低，降低了9.69%~36.76%。说明ugpase在蔗糖与淀粉的转换过程中起着较为重要的作用，其催化的反应方向影响着组织中这两种产物(蔗糖和淀粉)的分配。