杆状病毒acmnpvorf59基因的克隆表达、抗体制备及亚细胞定位

？用pcr方法从苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（autographacalifornicanucleopolyhedrovirus，acmnpv）基因组中扩增到orf59基因，插入原核表达载体pet-32a(+)，构建pet-ac59质粒，再将该质粒转化大肠杆菌bl21，在iptg诱导下表达了分子量约为30kda的融合蛋白。用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体，应用该抗体检测了acmnpv感染的昆虫宿主细胞（sf9）中orf59基因的表达，结果显示：在感染后的细胞中有两条分子量分别约为38kda和25kda蛋白质带能与所制备的抗体发生特异性反应。间接免疫荧光分析发现：在病毒感染的晚期，ac59蛋白同时存在于所感染宿主的细胞核和细胞质中。这些研究为下一步深入进行ac59功能的研究奠定了一定的基础。