重组h-ns蛋白对胸膜肺炎放线杆菌生物被膜形成的影响

？：胸膜肺炎放线杆菌（app）是重要的猪呼吸道病原菌，给世界养猪业造成严重的经济损失。生物被膜在许多细菌的感染与致病过程中起重要作用。我们在筛选app转座突变体库时，发现hns基因缺失突变可显著增强app血清1型生物被膜的形成，该基因编码一种dna结合蛋白（组蛋白样类核结构蛋白）。为了进一步研究h-ns蛋白对app生物被膜形成的影响，本文以app血清1型4074株基因组dna为模板，pcr扩增了408bp的hns基因编码区，克隆到原核表达载体pet-28c中获得重组质粒pet-hns，转化大肠杆菌bl21(de3)，经iptg诱导表达和组氨酸亲和层析柱纯化获得大小约19kda的重组蛋白rh-ns。将不同浓度的rh-ns添加到hns突变株1-21及其亲本菌株4074的培养基中，用微孔板法测定生物被膜的形成。结果显示，在不添加rh-ns时，4074株不能形成可见的生物被膜，而1-21株形成明显的生物被膜；在添加0.1-0.3μm的rh-ns的情况下，1-21株生物被膜的形成量随着rh-ns浓度的升高而降低，而4074株随着rh-ns浓度的升高而升高；rh-ns添加量超过0.4μm对两个菌株生物被膜形成未见明显影响。结果表明h-ns蛋白负调控app生物被膜的形成，并呈现一定的剂量效应。