反向重复rna介导转基因烟草对花生条纹病毒抗性

？构建携带花生条纹病毒（peanutstripevirus,pstv）外壳蛋白基因（cp）反向重复序列植物表达载体pkcp，转化农杆菌菌株gv3101，叶盘法转化本生烟，卡那霉素筛选得到的转化植株5~6叶期摩擦接种pstv。通过症状观察和elisa检测，t0代转基因烟草植株87%表现免疫，t1代不同系植株的免疫比例为60~100%，t2代多数系植株免疫比例达到100%。利用pstvcp特异探针对转基因植株t1代进行特异sirna的northernblot检测，转基因植株都含有不同量的特异sirna，而非转基因植株不含特异sirna；接种前，免疫植株比感病植株体内sirna含量高；不同转化系免疫植株在接种前、接种15天和50天后的叶片中都检测到特异sirna，同一植株不同时期，sirna含量相对稳定；不同转化系植株体内sirna含量存在差异。本试验成功利用dsrna获得对pstv具有较高比例抗性的转基因烟草植株。