抗鸡贫血病毒结构蛋白单克隆抗体制备及其对应抗原表位分析

？以纯化的原核表达的鸡贫血病毒结构蛋白为抗原，免疫6-8w的雌性balb/c鼠,经过三次免疫后，取其脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞进行融合，以纯化的蛋白为抗原进行elisa检测，将阳性细胞孔经过三次有限稀释，共获得6株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞株。间接免疫荧光试验证实6株单抗可以与鸡贫血病毒感染的mdcc-msb1细胞发生特异性反应，westernblot结果显示单抗与杆状病毒表达的vp1重组蛋白可以发生特异性反应。利用单克隆抗体亚型鉴定试剂盒进行亚型鉴定，结果表明6株单抗均为igg1亚型，且所有单抗的轻链均为κ链。用单克隆抗体对分段表达的vp1蛋白进行免疫印迹分析，初步鉴定了筛选出的单抗所对应的抗原表位，其中有四株单抗识别的表位位于vp1218-274位氨基酸之间，另外两株单抗识别的表位分别位于275-301位、324-369位氨基酸之间。