斑点叉尾鮰铁调素成熟肽在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性

？铁调素(hepcidin)是一种在动物肝脏中特异表达的碱性小分子抗菌肽，在机体免疫系统中发挥重要作用，被认为是抗生素的理想替代品。本研究根据毕赤酵母(pichiapastoris)偏爱性密码子人工合成斑点叉尾鮰(ictaluruspunctatus)hepcidin成熟肽基因(mch)。通过pcr方法在mch的5'端和3'端分别引入ecorⅰ和notⅰ酶切位点，扩增到的目的片段与表达载体ppic9k连接构建重组表达载体ppic9k-mch后，转化至毕赤酵母gs115细胞；以不同浓度梯度的g418筛选高拷贝转化子，1.0%甲醇、30℃、ph6.0诱导表达72h，获得重组体mch。结果显示，斑点叉尾鮰hepcidin成熟肽区域含25个残基，8个保守的半胱氨酸残基位于成熟肽的羧基端，表明该区域对hepcidin的抗菌活性具有重要作用。tricine-sds-page分析显示，分泌表达的重组体mch的分子量约为3800d，通过阳离子交换层析获得纯化的mch。抑菌实验表明，重组体抗菌肽mch对金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)和大肠杆菌(escherichiacoli)有抑菌活性。本研究首次实现了斑点叉尾鮰hepcidin成熟肽在毕赤酵母中的重组dna表达，为其产业化制备提供了重要的基础资料。