鹅肌球蛋白重链1基因myhc1全长cdna克隆、序列及胚胎期表达特征分析

？肌球蛋白是组成肌原纤维粗丝的主要成分，在肌肉生长发育和运动收缩过程起重要作用。本研究采用反转录pcr和快速扩增cdna末端(rapidamplificationcdnaends,race)方法，从太湖鹅(anseranser)肌肉中克隆到肌球蛋白重链1基因(myosinheavychain1,myhc1)的全长cdna，并运用生物信息学的方法对其进行分析，实时荧光定量pcr(real-timefluorescentquantitativepcr,qrt-pcr)检测myhc1基因在鹅胚胎期的表达情况。研究结果表明，鹅myhc1基因(genbank登录号:km675469)cdna全长6028bp，包含5823bp的开放性阅读框，57bp的5'端非编码区和148bp的3'端非编码区，共编码1940个氨基酸。经预测，鹅myhc1基因编码的蛋白质由31478个原子组成，分子式为c9746h15817n2753o3096s66，相对分子质量为223kd，等电点为5.62，平均亲水性为-0.786，属于不稳定亲水蛋白。在线预测鹅和鸡(gallusgallus)的myhc1蛋白质三维结构呈高度相似，由多螺旋和折叠片聚集成球状头部，并带有长纤维状α-螺旋尾部。鹅myhc1的编码区(codingsequence,cds)序列与鸡的同源性最高，为92.86%，与哺乳类同源性多数在84%左右，与两栖类同源性相对较低。鹅与鸡氨基酸同源性最高，为96.45%，与哺乳类的同源性多数在90%左右，与非洲爪蛙(xenopuslaevis)同源性较低，为78.13%。系统进化树分析表明，哺乳动物形成一个大分支，两栖类自成一支，鹅和红原鸡聚成一支，分子进化地位的关系最近，验证了鹅和鸡属于近缘物种。qrt-pcr检测到myhc1基因在胚胎期第7天开始表达，以后表达量逐渐升高，在15d表达量达到高峰后下降，25d之后逐渐趋于平稳，表明，myhc1基因在鹅胚胎期mrna水平的表达量呈先上升再下降的趋势。本研究首次获得了鹅myhc1的全长cdna序列、分子的结构特点和表达特征，显示该基因在鹅肌肉生长发育过程起重要作用，为该基因的功能及鹅肉质性状研究提供了基础资料。