体外改组强耐盐基因nhxfs1在烟草中的表达及耐盐性分析

？位于植物液泡膜的na+/h+逆向转运蛋白(nhx1)是将na+区隔化到液泡中的主要蛋白，对植物耐盐性起着极其重要的作用。nhxfs1基因是以拟南芥(arabidopsisthaliana)、水稻(oryzasativa)和菊花(floschrysanthemi)的液泡膜na+/h+逆向转运蛋白基因atnhx1、osnhx1和dmnhx1为模板，通过dna家族改组技术，对其进行体外定向分子进化获得的一个功能显著增强的新基因。本研究利用根癌农杆菌(agrobacteriumtumerfaciens)介导的叶盘法将nhxfs1基因转入烟草(nicotianabenthamiana)中，通过潮霉素抗性筛选出再生植株，经pcr和southernblot鉴定证实nhxfs1基因成功地整合到烟草基因组中。耐盐性测试结果显示，高盐胁迫条件下，萌发期和幼苗期的转基因烟草长势明显优于对照组，与对照组相比，转基因烟草叶片中积累了更多的脯氨酸和na+。rt-pcr和real-timepcr结果表明，nhxfs1基因在烟草中正常表达，盐胁迫条件下nhxfs1基因在根、茎、叶中的表达量分别上调了1.01、0.60和1.79倍，跟对照组相比有明显提高(p＜0.05)。研究结果提示，体外改组获得的新基因nhxfs1在植物耐盐基因工程和分子育种中具有较大的应用价值，同时也证明通过基因改组方法开发新基因用于改良植物耐盐性是可行的