应用抑制性差减杂交法筛选植物青枯菌致病相关基因

？植物青枯菌(ralstoniasolanacearum)致病力分化菌株po82兼具2号小种和npb(非香蕉致病)菌株的致病特征。为了研究该菌株致病力分化机理，本实验以po82为待测菌株，构建了抑制性差减杂交文库。建库质量分析结果表明，具有较高的接头连接以及文库构建效率，插入片段平均长度为300bp，文库构建质量较好。对文库中随机挑取阳性克隆进行测序，共筛选出44个po82菌株差异基因。生物信息学分析结果表明，所得差异基因主要涉及新陈代谢、转座酶、膜结构、分泌蛋白、毒力、转录因子以及未知功能等。利用基因敲除技术对其中的c00283基因功能进行了研究，结果表明，该基因在po82菌株致病过程中起重要作用。半定量rt-pcr结果表明，c00283基因在hrp诱导培养基中的表达情况与hrpb基因一致，初步确定其为ⅲ型分泌系统效应子。基础生物学实验结果表明，该基因对po82菌株的生长、生物膜形成及运动性没有影响。青枯菌po82菌株抑制性差减杂交文库的构建及致病相关基因的功能分析，为后续致病力分化的分子机理研究提供基础材料