瘤胃微生物fosmid文库蛋白酶活性克隆的筛选与序列分析

？在日粮蛋白质的降解过程中，蛋白酶是把蛋白质水解为肽或氨基酸的关键酶，由于受到纯培养技术的影响，瘤胃内产生蛋白酶活性的细菌和各种蛋白酶的遗传信息知之甚少。本实验旨在利用蛋白酶选择性培养基从瘤胃微生物fosmid文库中筛选出含蛋白酶活性的克隆子，通过生物信息学分析获得这些克隆子的遗传信息。应用脱脂乳粉和大豆蛋白粉两种蛋白酶选择性培养基，从30000个克隆中筛选得到14个具有蛋白酶活性的活性克隆。利用福林酚试剂法检测14个蛋白酶克隆子的酶活力，结果表明，每个克隆子分别具有不同的蛋白质分解能力。以酪蛋白为底物的克隆子酶活力介于0.59~2.74u/mg之间，以大豆蛋白粉为底物的克隆子酶活力在0.70~7.19u/mg之间，而且同一克隆对于不同的底物所表现的酶活力也不同。随机挑选10个活性克隆进行末端测序(genbank登录号：jy084410~jy084429)，经blast比对后发现，45%的基因序列与已知编码基因无法匹配，pro10f末端序列与金属肽酶匹配度为54%，属于肽酶m13家族，且该克隆蛋白酶最适ph值为7.0，为下一步研究该克隆的酶学性质和序列特征分析提供了基础资料