嗜水气单胞菌外膜蛋白(omp)在乳酸乳球菌中的表达及其对balb/c小鼠的免疫保护效果

？乳酸球菌(lactococcuslactis)是一种安全级微生物，为活载体疫苗传递抗原的理想选择。嗜水气单胞菌(aeromonashydrophila,ah)能引起鱼类等多种动物的败血病，因其血清型众多，寻找共同保护性抗原是进行疫苗研究的重点。为探究嗜水气单胞菌as1.927株外膜蛋白(omp)在乳酸乳球菌中的表达和检测其表达产物对小鼠的免疫保护效果，本研究将已克隆的ompa基因经bamhⅰ和xbaⅰ双酶切后连接载体pnz8048，转化乳酸乳球菌nz9000，nisin诱导表达，并进行sds-page分析鉴定。结果显示，重组基因工程菌l.lactis[pnz-ompa]表达的融合蛋白分子量约为36.2kd，成熟蛋白分子量约为33.7kd。将重组基因工程菌l.lactis[pnz-ompa]口服免疫balb/c小鼠(musmussulus)，用放射免疫法检测末次免疫一周后的各组小鼠肠粘膜分泌型免疫球蛋白a(siga)的水平以及用间接elisa法检测小鼠血清特异性抗体igg，结果发现，该重组基因工程菌能显著提高siga的分泌(p<0.05)；同时在小鼠血清中的特异性抗体含量也显著高于对照组(p<0.05)。末次免疫两周后用100ld50的ahas1.927(3.3×105cfu/ml)腹腔注射攻击小鼠，口服重组菌对小鼠的相对免疫保护力(relativepercentsurvival,rps)为87.5%，表明重组基因工程菌可诱导小鼠对ahas1.927产生一定的免疫保护作用。该结果将为开发安全有效的口服基因工程鱼用疫苗提供一定的实验基础。