梅岭土鸡原始生殖细胞的生物学特性

？作为精原细胞和卵原细胞的祖细胞，由于其全能性的特点可作为体外胚胎发育研究的良好模型，而禽类独特的生理和发育特点使得其原始生殖细胞(pgcs)在转基因研究中有着巨大价值。本研究通过对孵化5.5d的梅岭土鸡(gallusdomesticus)胚生殖腺中分离得到的pgcs，接种于24孔培养板在温度37℃、95%空气和5%co2的培养箱中进行体外培养；借助组织化学及免疫组织化学染色对pas(高碘酸希夫氏染色)、akp(碱性磷酸酶染色)、ssea-1(胚胎阶段特异性表面抗原-1)以及tert(端粒酶反转录酶)进行了鉴定；采用荧光定量pcr技术对pgcs阶段特异性表达基因cvh(鸡vasa基因同系物)、cdh(鸡死端同系物)、dazl(类无精症缺失)和干细胞多能性相关基因pouⅴ(pou结构域ⅴ类转录因子1)、nanog(nanog同源异型盒)、sox-2(性别决定区y盒2)基因表达进行了分析；利用脂质体介导法，将绿色荧光蛋白(pegfp-n3)基因导入鸡pgcs细胞，结果表明，pgcs集落有典型的鸟巢状结构，且pas、akp、ssea-1以及tert染色阳性；pgcs阶段特异性表达基因cvh、cdh、dazl和干细胞多能性相关基因pouv、nanog和sox-2在鸡pgcs中均远远高于在鸡成纤维细胞(cef)中的表达；转染24h后，绿色荧光蛋白均匀的充满细胞质和细胞核，转染效率最高为16％，研究结果为禽类pgcs分化过程中基因调控及基因标记、转基因动物克隆等技术提供了良好基础。