重组海参溶菌酶c端基因(sjlys-c)的可溶性表达和抑菌活性分析

？为进一步研究海参(stichopusjaponicus)溶菌酶基因(sjlys)(genbank登录号:ef036468)中不同片段表达产物的生物特性，本研究通过对其cdna片段的分析，发现c端基因区域所对应的蛋白质序列中含有非酶活性。根据已知的海参溶菌酶的cdna序列，设计出含有ncoⅰ和ecorⅰ酶切位点的特异性引物，从新鲜的海参肠中提取总rna，以其为模板利用rt-pcr扩增出长度为259bp的溶菌酶c端(sjlys-c)基因。将该目的基因连接到pet-32a(+)载体上，构建重组质粒pet-32a(+)-sjlys-c,再转化至大肠杆菌(escherichiacoli)rosetta(de3)plyss，成功地构建了重组蛋白sjlys-c的基因工程菌。利用该工程菌诱导发酵，结果显示它能高效表达出26kd左右的重组蛋白sjlys-c。经过westernblot分析，该重组蛋白在26kd左右能够与penta-his抗体发生特异性免疫反应。对纯化的重组蛋白sjlys-c进行了抑菌特性的分析，结果发现它对溶壁微球菌(micrococcuslysodeikticus)和副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)有较高的抑菌活性。此外，将该重组蛋白经100℃、40min处理后，其抑菌能力提高了5%~21%。研究结果表明，重组蛋白sjlys-c基因工程菌能够制备出具有可溶性的、并具有抑菌活性的重组蛋白sjlys-c，在农业和医药等行业中有潜在应用和开发价值。