草莓果实不同发育阶段抑制差减文库(ssh)的构建及相关基因的表达分析

？寻找控制草莓果实硬度、成熟软化和褐化等性状相关基因并进行有效的调控具有现实意义，本研究分别以丰香草莓(fragaria×ananassaduch.cv.toyonoka)果实大绿果期和转色期两个发育阶段的cdna为实验组(tester)和驱动组(driver)，利用抑制差减杂交(suppressionsubtractionhybridization,ssh)技术构建了正反两个cdna文库，分别包含516和524个克隆。通过est测序、序列拼接后，共获得707条uniests，其中正反向文库分别为369和338个非冗余序列(uniests)，包括123条拼接序列(contigs)和584条单一序列(singletons)。在nt库比对中有537条uinests与已知基因匹配，占比75.95%；在nr库比对中有509条序列有匹配蛋白，占比71.99%。有193个uniests能进行geneyontology(go)功能注释，其中细胞组分被注释了315次、分子功能被注释了332次、生物过程被注释了409次。uniests的功能分析显示，绿果期文库多数与细胞营养生长、分裂、早期胚胎发育和营养运输有关，转色期文库主要与刺激代谢物形成、色素合成、果实软化和种子成熟有关，与草莓果实发育和成熟生理过程基本一致。采用qrt-pcr对果实成熟相关蛋白(putativeripening-relatedprotein)、多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase，pg)、myb转录因子(mybtranscriptionfactor，myb)、类异黄酮还原酶(isoflavonereductase-likegene，irl)、胚胎发育晚期丰富蛋白(laterembryoabundantprotein，lea)、乙烯受体etr1(ethylenereceptoretr1)等6个基因在草莓果实发育、成熟期在根、叶、花中的表达模式进行了分析，研究结果为进一步研究草莓果实发育和成熟机制提供基础资料。