海洋细菌qdc01的鉴定及其几丁质酶基因的克隆与分析

？海洋微生物是几丁质酶的重要来源。本研究从青岛海域海蜇(rhopilemaesculenta)体中分离到一株产几丁质酶的细菌qdc01，通过形态、培养特征以及16srdna序列同源性分析，将该菌株鉴定为嗜水气单胞菌(aeromonashydrophila)。根据已报道的嗜水气单胞菌几丁质酶基因相关序列设计引物，克隆了qdc01几丁质酶基因，命名为ahchi(genbank:jx863407)。应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析，结果显示，ahchi开放阅读框(orf)长2100bp，无内含子，其编码的蛋白由699个氨基酸组成，分子量为74.875kd，等电点为5.81。序列比对和同源性分析结果表明，该基因与嗜水气单胞菌(aeromonashydrophilasubsp.hydrophila)atcc7966t几丁质酶基因(genbank登录号:cp000462)的相似性最高，为98%；相应的氨基酸序列同源性为98%。系统进化分析以及ahchi的保守结构域分析表明，ahchi属于ⅰ型几丁质酶，糖苷水解酶19家族。采用限制性内切酶(bamhⅰ和hindⅲ)双酶切法构建了原核表达载体pet-30a(+)-ahchi，并经iptg诱导在大肠杆菌(escherichiacoli)中成功表达。在基础产酶发酵条件下，菌株qdc01所产粗酶液酶活力达0.21u/ml，采用文献报道的优化产酶发酵条件，菌株qdc01所产粗酶液酶活力可达0.58u/ml，是前人报道的产几丁质酶嗜水气单胞菌swch-6所产酶活力的1.49倍，同时也高于已报道的气单胞菌(aeromonassp.)cj-5的酶活力(0.41u/ml)，为微生物源几丁质酶开发应用提供了又一优良种质资源。