鱼源嗜水气单胞菌aopb-/aopd-/aroa-缺失株的构建及鉴定

？嗜水气单胞菌(aeromonashydrophila)能引起多种鱼类暴发性出血性败血症，为研制更加安全的嗜水气单胞菌口服活疫苗，构建了鱼源嗜水气单胞菌aopb-/aopd-/aroa-缺失株。首先构建含缺失369bp的aopb/aopd基因(编码嗜水气单胞菌外膜蛋白b、d)与蔗糖敏感基因(sacb)的重组自杀性质粒preaopb/aopd，与嗜水气单胞菌ah2056接合转移，应用二步法筛选aopb-/aopd-缺失株，pcr证实aopb/aopd基因的缺失突变。在此基础上，构建另一个含缺失1290bp的aroa基因(编码5-酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶)与庆大霉素抗性片段（aacc1片段）的重组自杀性质粒psuparoa，与aopb-/aopd-缺失株接合转移，利用庆大霉素抗性筛选aopb-/aopd-/aroa-缺失株，用pcr证实aroa基因的缺失突变。进一步对aopb-/aopd--/aroa-缺失株进行生长特性、对鱼的毒力等生物学特性鉴定。结果表明，aopb-/aopd-/aroa-缺失株构建成功，且该缺失株为毒力丧失、营养缺陷株。