猪源抗菌肽protegrin-1基因在大肠杆菌中的融合表达

？为了使猪源抗菌肽protegrin-1(pg-1)在原核表达载体中获得高效表达，在不改变pg-1氨基酸的基础上，根据大肠杆菌偏好密码子表，替换pg-1部分密码子，设计两段互补的引物，利用搭桥pcr技术扩增完整的pg-1成熟肽基因，重组至融合表达载体pgex-4t-1中，构建成抗菌肽pg-1基因融合表达载体pgex4t-pg-1，转化至大肠杆菌(escherichiacoli)bl21(de3)plys中，筛选得到阳性克隆，并用1.0mmol/l的iptg进行诱导表达。sds-page电泳图谱显示在28kd处有特异性的蛋白条带出现，经westernblot检测表明重组子已经成功地在大肠杆菌中表达了融合蛋白。纯化得到的gst-pg-1用凝血酶切割后，经用亲合层析得到分子量约为2kd抗菌肽pg-1蛋白1.38mg/l。对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)抑菌试验结果表明，重组抗菌肽pg-1具有明显的抑菌效果。