利用rna干扰抑制牛胎儿成纤维细胞中朊蛋白基因prnp的表达

？疯牛病是由朊蛋白基因prnp编码的正常朊蛋白prpc发生构象变化为致病性朊蛋白prpsc而引起的传染性疾病,prpsc在中枢神经的聚集引发了动物的传染性海绵状脑病。降低(下调)prpc的表达量使其减少向prpsc转化，是抑制疯牛病的有效途径。本研究利用rnai技术，针对牛源cdna序列设计了3段prpc干扰序列及一个阴性对照，将其连接到rna干扰载体pgenesil-1上，转染牛胎儿成纤维细胞，通过荧光定量pcr和westernblot检测有干扰序列的有效性，并用700μg/mlg418对细胞进行药物筛选。结果表明，3对干扰片段的抑制效率分别是51.2%、85.7%和74.6%，阴性对照的干扰效率是2.05%，得到了一个较为有效地干扰片段，并且筛选出了稳定转染的细胞单克隆，为进一步的体细胞核移植提供供体细胞。