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农业生物技术学报 2013
酵母双杂交筛选水稻osmads15互作蛋白, PP. 127-136 Keywords: 水稻,osmads15,酵母双杂交,cdna文库,bifc Abstract: ?蛋白间的相互作用对于生物学功能的发挥是非常重要的。mads-box基因的功能主要通过形成同源或异源二聚体或四聚体来实现。水稻osmads15是一个ap1/squa亚家族的成员,在水稻开花时间调控、不定根的发育、茎的生长和内稃的发育等过程中具有重要作用,但与之有相互作用的蛋白却知之甚少。本实验用酵母双杂交法从水稻(oryzasativassp.japonica)cdna文库中筛选与osmads15有相互作用的蛋白。构建了pgbkt7-osmads15诱饵表达载体,然后与pgadt7-cdnalibrary共转化到酵母(saccharomycescerevisiae)ah109中,通过顺序筛选his3、ade2和lacz3个报告基因的表达,共得到25个unigene。在烟草(nicotianabenthamiana)细胞中用bifc实验验证osmads15和候选基因osmads1、osmads14、osmads8之间的相互作用,结果表明在烟草细胞的核内,osmads15相连的nyfp可以与osmads1、osmads14、osmads8相连的cyfp分别形成互补而产生荧光,证实其间在植物体内也具有相互作用。本实验为今后近一步研究osmads15在水稻花发育和水稻营养器官生长发育中的功能提供了基础资料。
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