猪nramp1基因启动子克隆及其组织表达活性分析（猪-专刊）

？nramp1基因在猪肺泡巨噬细胞中具有较高的组织表达特异性，本研究的目的是克隆并分析猪(susscrofa)nramp1基因在肺泡巨噬细胞中的特异性表达调控元件。本研究首先利用5'race技术确定了nramp1基因转录起始位点，在此基础上构建了－1327~＋86bp区域内不同长度的嵌套缺失片段，分别连接至pgl3-basic载体上，构建了pluc1430、pluc1136、pluc840、pluc751、pluc487、pluc379、pluc274及pluc179共8个缺失表达载体。采用脂质体转染法，与海肾荧光素酶载体共转染猪肺泡巨噬细胞、肾细胞、脂肪前体细胞和胎儿成纤维细胞，采用双荧光素酶报告系统验证了nramp1基因不同启动子片段的表达活性，结果表明nramp1基因核心启动子区位于－386~－173bp。进一步比较了pluc487[－386~＋86]启动子区在巨噬细胞、猪肾细胞、脂肪细胞和胎儿成纤维细胞中的表达活性，结果表明nramp1基因在巨噬细胞中的表达活性极显著地高于肾细胞、脂肪细胞和成纤维细胞(p<0.01)，表明nramp1基因启动子具有较高的巨噬细胞特异性。本研究获得了能够在猪肺泡巨噬细胞中特异表达的调控元件，为进一步实现外源基因在猪肺泡巨噬细胞中的特异性表达提供了基础。