苏云金杆菌cry2ab可溶蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

？苏云金杆菌cry2ab蛋白是一类对鳞翅目昆虫有特异性毒性作用的毒素蛋白，已广泛应用于针对鳞翅目害虫的防治之中。依据苏云金杆菌cry2ab基因序列设计一对全长引物，从苏云金杆菌(bacillusthuringiensis)wb9菌株总dna中克隆出cry2ab基因全序列，构建cry2ab-pk表达载体，将获得的cry2ab-pk阳性克隆进行原核诱导表达，获得约90kd的cry2ab-gst融合蛋白，经批量纯化并切除gst标签后获得可溶cry2ab蛋白，约65kd。利用纯化cry2ab可溶蛋白免疫新西兰雄性大白兔(oryctolaguscuniculus)，制备cry2ab兔源多克隆抗血清，通过间接elisa法测定cry2ab抗血清效价超过1∶150000。westernblot测定结果表明，制备的cry2ab兔源抗血清能特异性识别cry2aa及cry2ab抗原蛋白，不能识别cry1ab及cry3aa抗原蛋白。研究结果对深入研究cry2a毒素蛋白作用机理及毒素与受体间互作关系提供了技术支持。