牛oct4基因克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

？以胎牛的原始生殖嵴为材料，用rt-pcr的方法扩增出牛oct4基因与genbank公布的序列的同源性为99.4%。将其插入到反转录病毒载体pmscvneo的多克隆位点，获得重组反转录病毒质粒pmscvneo-oct4。通过lipofectamine2000将其转导入包装细胞pt67，应用含有g418的培养液对转染后的包装细胞进行抗性筛选，获得阳性细胞克隆。细胞上清经过rt-pcr、透射电镜及病毒滴度测定等方法鉴定，证实所包装病毒存在，其滴度值为8.83×107cfu/ml。结果表明已获得携带牛oct4基因的高滴度感染性反转录病毒。本研究以逆转录病毒载体为基础构建了牛oct4基因真核表达载体，并获得能够产生包含有oct4基因的高滴度病毒的单克隆细胞株，为进一步诱导产生牛多能性诱导干细胞（ipscs）研究奠定试验基础。