牛生发泡期裸卵体外成熟培养体系的建立

？为研究特定基因或蛋白质在牛卵母细胞体外成熟过程中的角色与作用，探索牛卵母细胞体外成熟的分子机理，需要建立一个能够检测基因或蛋白质在牛卵成熟过程中作用的技术平台。本研究在牛卵母细胞体外成熟培养的不同时间（0h和10h），剥除卵母细胞外周的颗粒细胞后继续培养，观察其与正常体外成熟培养卵母细胞之间有何差异。研究结果显示：成熟培养0h脱颗粒细胞的卵母细胞，与正常成熟培养的卵母细胞在成熟率（19.51%vs80.14%,p<0.05），卵裂率（27.08%vs82.61%,p<0.05），孤雌激活胚胎囊胚率（7.69%vs21.71%,p<0.05）方面差异显著；成熟培养10h后脱颗粒细胞的牛卵母细胞，与正常体外成熟培养的卵母细胞相比，在成熟率（82.71%vs80.14%,p>0.05），卵裂率（83.01%vs82.61%,p>0.05），孤雌激活胚胎囊胚率（19.30%vs21.71%,p>0.05）等方面无显著差异。在此基础上，向成熟培养10小时脱颗粒细胞的卵母细胞内注射pvenus－h1foo的mrna、pvenus质粒、pdsred1—n1质粒和pdsred1-h1e质粒等都能够得到表达。非功能标记基因显微注射组与对照组在卵母细胞成熟率（81.42%vs82.03%,p>0.05），卵裂率（75.24%vs78.15%,p>0.05），孤雌激活胚胎囊胚率（17.42%vs18.82%,p>0.05）上差异不显著。本研究可以得到如下结论：在成熟培养10小时，剥离颗粒细胞不会影响牛卵母细胞的发育潜能，这一技术平台可以用于牛卵母细胞体外成熟分子机制的研究。